雷公藤甲素对治疗哮喘有没有效果?

www.hnjkw.net 2013-05-08 作者:佚名  来源:首席医学网 浏览次数:

  导读:探讨雷公藤甲素对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道重塑的影响。

  【方法】 40只雌性SPF级BABL/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只。A组为生理盐水对照组;B组为卵蛋白(OVA)哮喘组;C组为雷公藤甲素治疗组;D组为地塞米松治疗组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,过碘酸-雪夫(PAS)染色,Masson三色染色以及抗转化生长因子β1(TGF-β1)抗体免疫组化染色。测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm),支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm)。取右肺组织行RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达。

  【结果】 B组小鼠支气管管壁厚度、杯状细胞百分数、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、TGF-β1的转录和表达水平均显著高于A组(P < 0.01)。C组小鼠上述各指标依次均显著低于B组(P < 0.05),D组小鼠上述指标显著低于B组(P < 0.05)。但C组和D组上述各指标间差异无统计学意义(P > 0.05)。肺组织的TGF-β1的蛋白表达水平与支气管的管壁厚度,平滑肌厚度,杯状细胞比,胶原纤维含量成正相关(相关系数分别为0.755、0.815、0.898、0.837;P < 0.01)。

  【结论】 雷公藤甲素可抑制BABL/c哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过抑制TGF-β1的表达而实现的。

  【关键词】 哮喘; 气道重塑; 小鼠; 雷公藤甲素

  气道重塑(airway remodeling)是支气管哮喘的重要特征之一。其病理学特点包括气道上皮损伤,上皮下纤维化,蛋白多糖沉积,弹性蛋白增加,平滑肌增生肥大,黏液腺增生、化生和新血管的生长和增生[1]。文献报道转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在哮喘气道重塑的发生中起重要作用[2]。雷公藤属卫矛科植物,具有扰炎及免疫调节作用[3]。我们近期的研究提示雷公藤甲素是治疗糖皮质激素抵抗型支气管哮喘的有效选择[4]。本研究探讨雷公藤甲素对哮喘小鼠肺组织TGF-β1表达和气道重塑的影响。

  1 材料与方法

  1.1 材 料

  动物:雌性SPF级BABL/c纯系小鼠40只,鼠龄6 ~ 8周,体质量l6 ~ 20 g,购自中山大学实验动物中心,(合格证号:广东省实验动物检测所合格证2006A059号)。所有小鼠饲养于中山大学实验动物中心,SPF级实验室。

  主要试剂:OVA(V级、纯度 > 98%,美国Sigma公司);雷公藤甲素(上海博升生物科技有限公司);氢氧化铝(广州化学试剂厂);TGF-β1大鼠抗小鼠多克隆抗体(美国ABCam公司);链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物免疫组化检测试剂盒(福建迈新生物技术开发公司);Trizol(美国Invitrogen公司);PCR试剂盒(美国promega公司);逆转录试剂盒(美国Fermentas公司)。

  设备:雾化器(boy037G6000型,德国Pari公司)、聚合酶链反应扩增仪(GeneAmp2700型,美国PE公司)、凝胶电泳槽来(美国Bio-Rad公司)、凝胶数字成像系统(美国Bio-Rad公司)、image-pro plus6.0图像分析软件(美国MediaCybernetics公司)、Nikon TE2000-U倒置显微镜(日本尼康公司)。

  1.2 方 法

  1.2.1 动物分组及哮喘模型的建立 小鼠按随机数字表法分为4组,每组10只。①生理盐水(NS)对照组(A组):小鼠在致敏阶段给予NS 1 mL腹腔注射,激发阶段给予NS雾化吸入。②哮喘组(B组):小鼠分别于第1、14 天腹腔注射1 mL致敏液(OVA 10 μg + 氢氧化铝1 mg);从第21 天开始为激发阶段,将小鼠置于约0.5 m × 0.5 m × 0.5 m大小的雾化吸入箱中,通过PARI MONDIAL 037型超声雾化器雾化吸入25 g/L OVA溶液5 mL,每次30 min,每周雾化3次,连续8周[5-6];③雷公藤甲素治疗组(C组):以上述同样方法用OVA进行致敏和激发小鼠,在每次雾化激发哮喘前30 min腹腔注射雷公藤甲素40 μg/kg[7-8];④地塞米松治疗组(D组):以上述同样方法用OVA进行致敏和激发小鼠,在每次雾化激发哮喘前30 min腹腔注射地塞米松2 mg/kg[9-10]。

  1.2.2 标本收集 各组小鼠雾化吸人24 h后,以10 g/L戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后,取右肺组织置于液氮罐中保存,以备抽提RNA。左肺组织以20 cmH2O(1 cmH2O = 0.098 kPa)压力灌注40 g/L的多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(PBS),然后浸泡在多聚甲醛-PBS液中24 h。

  1.2.3 组织学检查 肺组织经甲醛固定后,常规脱水包埋,并做苏木精-伊红(HE)染色,过碘酸-雪夫(PAS)染色,Masson三色染色和用抗TGF-β1抗体行免疫组化染色。每只小鼠随机选3张肺组织切片,每张切片以单盲法随机选取横断面较圆、直径100 μm的细支气管5支观察。采用美国MediaCybernetics公司image-pro plus6.0图像分析软件分别测量支气管基底膜周径(Pbm,μm)、总管壁的面积(WAt,μm2)、管壁平滑肌层面积(WAm,μm2)、支气管周围胶原纤维面积(μm2)。所有测量值均用相应的Pbm标准化,分别以WAt/Pbm,WAm/Pbm表示,代表相应管壁层的厚度,并以校正后的胶原纤维面积(μm2/μm)表示胶原纤维含量,以杯状细胞占所在支气管上皮细胞的比例表示气道的黏液分泌能力。

(责任编辑:李炬)